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蛋白分子量测定

分子量测定能解决的生物学问题

       分子量是有机化合物最基本的理化性质参数。分子量正确与否往往代表着所测定的有机化合物及生物大分子的结构正确与否。分子量也是多肽、蛋白质等鉴定中首要的参数,也是基因工程产品报批的重要数据之一。

       凡星生物采用Bruker公司最新推出的ultrafleXtreme MALDI TOF/TOF质谱系统,为广大科研工作者提供生物分子分子量测定服务,用于检测目标蛋白或多肽是否存在,有无二聚体存在,以及进行样品纯度情况的大体评估。

关于样品

蛋白/肽段的纯度

1. 样品纯度最好要>90%

2. 样品准备过程中尽量避免表面活性剂,例如SDSTriton-X等的使用;盐浓度,例如Tris等也尽量降低;

3. 样品的需要量约为10-50ug

4. 如果您在准备样品的过程中必须要用到表面活性剂以及较高的盐浓度,我们收到您的样品后会首先进行上述化合物的去除实验,然后进行后续的分子量测定。

样品运输

1. 我们推荐您将样品冻干后进行运输,冻干样品中蛋白非常稳定;

2. 液体样品推荐干冰运输,短途运输冰袋也可以;

注意

胶粒样品或者转移到PVDF膜上的样品不适合于分子量测定实验。

实验原理

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱,具有样品消耗量少、灵敏度高、测定速度快、易于实现高通量、可对蛋白进行大规模的鉴定及生物大分子的分子量测定等特点,为蛋白质组学研究提供了一种强有力的分析测试手段。简便,直观,大分子混合物不经分离可以直接进行测定,基本不产生碎片峰是MALDI-TOF-MS最大的优势,因此在生物大分子分子量测定中得到广泛应用。仪器主要由两部分组成:基质附助激光解吸电离离子源(MALDI)和飞行时间质量分析器(TOF)。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子,而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子,而使生物分子电离的过程。它是一种软电离技术,适用于混合物及生物大分子的测定。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比,检测离子。MALDI-TOF的准确度高达0.1%-0.01%,远远高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术,目前可测定生物大分子的分子量范围为700-600000Da


在最终的技术报告中,为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:

1, 实验步骤(中英文)

2, 相关的质谱参数(中英文)

3, 鉴定物质的分子量信息

4, 质谱图片

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